prover som har ett absorbansvärde som faller utanför intervallet för standardkurvan

för att få ett korrekt resultat bör dessa prover spädas eller koncentreras innan de fortsätter med ELISA-färgningen. För dessa prover måste koncentrationen erhållen från standardkurvan vid analys av resultaten multipliceras med utspädningsfaktorn.

beräkning av variationskoefficienten

koefficientvariationen (CV) är förhållandet mellan standardavvikelsen och den genomsnittliga:

Cv = https: / / p>

detta uttrycks i procent av variansen till medelvärdet och indikerar eventuella inkonsekvenser och felaktigheter i resultaten. Större varians indikerar större inkonsekvens och fel. Vissa datorprogram kan beräkna CV-värdena från ELISA-resultat.

hög CV kan orsakas av:

  • felaktig pipettering; se till att pipettspetsarna är förseglade på pipetten före användning så att de drar upp för att korrigera volymen av vätska
  • stänk av reagens mellan brunnar
  • bakteriell av svampkontaminering av antingen skärmprover eller reagens
  • korskontaminering mellan reagens
  • temperaturvariationer över plattan; se till att plattorna inkuberas i en stabil temperaturmiljö bort från drag
  • några av brunnarna torkar ut; se till att plattorna alltid täcks vid inkubationssteg

Spikåtervinning

Spikåtervinning bestämmer vilken effekt provkomponenterna har på detektion av antigenet av antikroppen. Till exempel kan de många proteinerna som finns i vävnadsodlings supernatant hindra antikroppsbindning och öka signal-brusförhållandet, vilket resulterar i underskattning av målkoncentrationen.

kända koncentrationer av protein spikas i både provmatrisen och ett standardspädningsmedel. Det spikade proteinet kvantifieras med hjälp av analysen och resultat från provmatrisen och standardutspädningsmedlet jämförs.

om resultaten är identiska anses provmatrisen vara giltig för analysförfarandet. Om återhämtningen är annorlunda stör komponenterna i provmatrisen analytdetektionen.

vad händer om ett spikåtervinningsexperiment indikerar att provmatrisen påverkar resultaten?

Vi rekommenderar att du producerar standardkurvan med standard utspädd i provmatrisen. Eventuella effekter på resultaten från provmatrisen kommer också att finnas i standarden, och därför är jämförelsen mellan standardkurvan och proverna mer exakt. Många av våra ELISA-kit innehåller ett standardserumutspädningsmedel för detta ändamål.

en annan lösning är att ändra provmatrisen. Till exempel, om snyggt biologiskt prov används, försök att späda detta i standard spädningsmedel. Med det här alternativet måste du dock se till att utspädningsfaktorn beaktas vid analys av resultaten och att koncentrationen förblir inom den linjära delen av standardkurvan.

se mer av våra ELISA-Kit, reagenser och protokoll eller granska våra membranantikroppsarrayer, såsom cytokin array ab133997, som kan användas för att mäta många proteiner samtidigt.

ELISA guide

>> Nästa sida: Elisa felsökningstips

<< föregående sida: ELISA-analys

ladda ner hela guiden

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.