probe care au o valoare a absorbanței care se încadrează în intervalul curbei standard

pentru a obține un rezultat precis, aceste probe trebuie diluate sau concentrate înainte de a continua colorarea ELISA. Pentru aceste probe, concentrația obținută din curba standard la analizarea rezultatelor trebuie înmulțită cu factorul de diluare.

calculul coeficientului de variație

variația coeficientului (CV) este raportul dintre deviația standard a valorii minime a valorii minime a valorii minime a valorii minime a valorii minime:

Cv= XV

acesta este exprimat ca procent de variație față de medie și indică orice inconsecvențe și inexactități ale rezultatelor. Varianța mai mare indică o inconsecvență și o eroare mai mari. Unele programe de calculator pot calcula valorile CV din rezultatele ELISA.

CV-ul ridicat poate fi cauzat de:

  • pipetare inexactă; asigurați-vă că vârfurile pipetei sunt etanșate la pipetă înainte de utilizare, astfel încât să se elaboreze pentru a corecta volumul de lichid
  • stropirea reactivilor între puțuri
  • contaminarea bacteriană a fungilor fie a probelor de ecran, fie a reactivilor
  • contaminarea încrucișată între reactivi
  • variațiile de temperatură de-a lungul plăcii; asigurați-vă că plăcile sunt incubate într-un mediu de temperatură stabil, departe de curenți
  • ; asigurați-vă că plăcile sunt întotdeauna acoperite la etapele de incubare

recuperarea Spike

recuperarea Spike determină efectul constituenților eșantionului asupra detectării antigenului de către anticorp. De exemplu, numeroasele proteine conținute în supernatantul culturii tisulare pot împiedica legarea anticorpilor și pot crește raportul semnal / zgomot, ducând la subestimarea concentrației țintă.

concentrațiile cunoscute de proteine sunt introduse atât în matricea eșantionului, cât și într-un diluant standard. Proteina cu vârf este cuantificată folosind testul și rezultatele din matricea eșantionului și diluantul standard sunt comparate.

dacă rezultatele sunt identice, atunci matricea eșantionului este considerată valabilă pentru procedura de testare. Dacă recuperarea este diferită, atunci componentele din matricea eșantionului interferează cu detectarea analitului.

Ce se întâmplă dacă un experiment de recuperare a spike a indicat că matricea eșantionului afectează rezultatele?

vă recomandăm producerea curbei standard folosind standard diluat în matricea eșantionului. Orice efecte asupra rezultatelor din matricea eșantionului vor fi, de asemenea, prezente în standard și, prin urmare, comparația dintre curba standard și eșantioane este mai precisă. Multe dintre kiturile noastre ELISA conțin un diluant seric standard în acest scop.

o altă soluție este modificarea matricei eșantionului. De exemplu, dacă se utilizează o probă biologică îngrijită, încercați să diluați acest lucru în diluant standard. Cu toate acestea, cu această opțiune, va trebui să vă asigurați că factorul de diluare este luat în considerare la analizarea rezultatelor și că concentrația rămâne în secțiunea liniară a curbei standard.

Vizualizați mai multe kituri, reactivi și protocoale ELISA sau examinați matricele noastre de anticorpi cu membrană, cum ar fi matricea de citokine ab133997, care poate fi utilizată pentru a măsura simultan multe proteine.

ghid ELISA

>> Pagina următoare: sfaturi de depanare ELISA

<< pagina anterioară: analiza ELISA

descărcați Ghidul complet

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.