amostras com um valor de absorvância que cai da gama da curva-padrão

para obter um resultado preciso, estas amostras devem ser diluídas ou concentradas antes de se proceder à coloração ELISA. Para estas amostras, a concentração obtida a partir da curva-padrão ao analisar os resultados deve ser multiplicada pelo factor de diluição.

calculando o coeficiente de variação

a variação do coeficiente (CV) é a razão entre o desvio-padrão σ e a média µ:

Cv= σ
µ

isto é expresso como uma percentagem de variância para a média e indica quaisquer inconsistências e imprecisões nos resultados. Variância maior indica maior inconsistência e erro. Alguns programas de computador podem calcular os valores CV a partir dos resultados ELISA.

CV elevado pode ser causado por:

  • pipetagem imprecisa; garantir as pontas de pipetas são selados para a pipeta antes de usar para que eles elaboram para corrigir o volume de líquido
  • Salpicos de reagentes entre os poços
  • Bacteriana de contaminação fúngica da tela amostras ou reagentes
  • de contaminação Cruzada entre os reagentes
  • variações de Temperatura através de placa; assegurar as placas são incubadas em um estável a temperatura ambiente longe de correntes de ar
  • que Alguns dos poços de secagem; assegurar que as placas são sempre cobertas em fases de incubação

recuperação de picos

recuperação de picos determina o efeito que os constituintes da amostra têm na detecção do antigénio pelo anticorpo. Por exemplo, as muitas proteínas contidas no sobrenadante da cultura de tecidos podem impedir a ligação de anticorpos e aumentar a razão sinal / ruído, resultando na subestimação da concentração-alvo.as concentrações conhecidas de proteínas são injectadas na matriz da amostra e num diluente padrão. A proteína enriquecida é quantificada utilizando o ensaio e os resultados da matriz da amostra e do diluente padrão são comparados.se os resultados forem idênticos, considera-se que a matriz da amostra é válida para o procedimento de ensaio. Se a recuperação for diferente, então os componentes na matriz da amostra estão interferindo com a detecção do analito.e se um experimento de recuperação de picos indicasse que a matriz da amostra está afetando os resultados?recomendamos a produção da curva padrão utilizando a matriz padrão diluída na amostra. Quaisquer efeitos sobre os resultados da matriz da amostra também estarão presentes no padrão, e, portanto, a comparação entre a curva padrão e as amostras é mais precisa. Muitos dos nossos kits ELISA contêm um diluente sérico padrão para este fim.outra solução é Alterar a matriz da amostra. Por exemplo, se for utilizada uma amostra biológica pura, tente diluir isto em diluente padrão. No entanto, com esta opção, terá de garantir que o factor de diluição é tido em conta ao analisar os resultados e que a concentração se mantém dentro da secção linear da curva-padrão.

Ver mais dos nossos kits ELISA, reagentes e protocolos ou rever as nossas matrizes de anticorpos de membrana, tais como a matriz de citocinas ab133997, que podem ser usados para medir muitas proteínas simultaneamente.

ELISA guia

>> Próxima página: ELISA dicas de solução de problemas

<< página Anterior: ELISA análise

faça o Download do guia completo

Deixe uma resposta

O seu endereço de email não será publicado.