próbki, których wartość absorbancji wypada poza zakres krzywej standardowej

aby uzyskać dokładny wynik, próbki te należy rozcieńczyć lub zatężyć przed przystąpieniem do barwienia ELISA. W przypadku tych próbek stężenie uzyskane z krzywej standardowej podczas analizy wyników należy pomnożyć przez współczynnik rozcieńczenia.

obliczanie współczynnika zmienności

zmienność współczynnika (CV) jest stosunkiem odchylenia standardowego σ do średniej µ:

CV= σ
µ

jest to wyrażone jako procent wariancji do średniej i wskazuje na wszelkie niespójności i nieścisłości w wynikach. Większa wariancja wskazuje na większą niespójność i błąd. Niektóre programy komputerowe mogą obliczać wartości CV na podstawie wyników ELISA.

wysokie CV może być spowodowane przez:

  • niedokładne pipetowanie; upewnij się, że końcówki pipety są uszczelnione do pipety przed użyciem, aby uzyskać odpowiednią objętość cieczy
  • rozpryskiwanie odczynników między studzienkami
  • bakteryjne zanieczyszczenie grzybicze próbek przesiewowych lub odczynników
  • zanieczyszczenie krzyżowe między odczynnikami
  • zmiany temperatury na płytce; upewnij się, że płytki są inkubowane w stabilnym środowisku temperaturowym z dala od przeciągów
  • niektóre studzienki wysychają; upewnij się, że płytki są zawsze pokryte na etapach inkubacji

odzyskiwanie kolców

odzyskiwanie kolców określa wpływ składników próbki na wykrywanie antygenu przez przeciwciało. Na przykład, wiele białek zawartych w supernatancie w hodowli tkankowej może utrudniać Wiązanie przeciwciał i zwiększać stosunek sygnału do szumu, co skutkuje niedoszacowaniem stężenia docelowego.

znane stężenia białka są dodawane zarówno do matrycy próbki, jak i do standardowego rozcieńczalnika. Kolczaste białko jest oznaczane ilościowo za pomocą testu i porównuje się wyniki z matrycy próbki i standardowego rozcieńczalnika.

Jeśli wyniki są identyczne, to matryca próbki jest uważana za ważną dla procedury badania. Jeśli odzysk jest inny, to składniki w macierzy próbki zakłócają wykrywanie analitu.

Co jeśli eksperyment odzyskiwania spike ’ a wykazał, że matryca próbki wpływa na wyniki?

zalecamy wykonanie krzywej wzorcowej przy użyciu wzorca rozcieńczonego w macierzy próbki. Każdy wpływ na wyniki z matrycy próbki będzie również obecny w normie, a zatem porównanie krzywej standardowej z próbkami jest dokładniejsze. Wiele z naszych zestawów ELISA zawiera standardowy rozcieńczalnik do tego celu.

innym rozwiązaniem jest zmiana macierzy próbki. Na przykład, jeśli używana jest czysta próbka biologiczna, spróbuj rozcieńczyć ją w standardowym rozcieńczalniku. Jednak w przypadku tej opcji należy upewnić się, że współczynnik rozcieńczenia jest brany pod uwagę podczas analizy wyników i że stężenie pozostaje w liniowym przekroju krzywej standardowej.

Zobacz więcej naszych zestawów ELISA, odczynników i protokołów lub przejrzyj nasze tablice przeciwciał membranowych, takie jak tablica cytokin ab133997, które mogą być używane do pomiaru wielu białek jednocześnie.

przewodnik ELISA

>> Następna strona: porady dotyczące rozwiązywania problemów ELISA

<< Poprzednia strona: analiza ELISA

pobierz cały poradnik

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.