azon minták, amelyek abszorbanciaértéke a standard görbe tartományán kívül esik

a pontos eredmény elérése érdekében ezeket a mintákat hígítani vagy sűríteni kell, mielőtt folytatnák az ELISA-festést. Ezekre a mintákra az eredmények elemzése során a standard görbéből kapott koncentrációt meg kell szorozni a hígítási tényezővel.

A variációs együttható kiszámítása

A variációs együttható (CV) a standard deviáció aránya az átlaghoz képest:

Cv= ++

Ez az átlagtól való eltérés százalékában van kifejezve, és jelzi az eredmények esetleges következetlenségeit és pontatlanságait. A nagyobb eltérés nagyobb következetlenséget és hibát jelez. Egyes számítógépes programok kiszámíthatják a CV értékeket az ELISA eredmények alapján.

a magas CV-t a következők okozhatják:

  • pontatlan pipettázás; használat előtt győződjön meg arról, hogy a pipettahegyek a pipettához vannak lezárva, hogy megfelelő mennyiségű folyadékot szívjanak fel
  • reagensek fröccsenése a kutak között
  • a szűrőminták vagy reagensek gombás szennyeződésének baktériuma
  • A reagensek közötti keresztszennyeződés
  • hőmérsékletváltozások a lemezen; győződjön meg arról, hogy a lemezeket stabil hőmérsékleti környezetben inkubálják, a huzattól távol
  • a kutak egy része kiszárad; győződjön meg arról, hogy a lemezeket mindig befedik az inkubációs lépésekben

tüske-visszanyerés

a tüske-visszanyerés meghatározza a mintaösszetevők hatását az antigén antitest általi kimutatására. Például a felülúszó szövetkultúrában található sok fehérje akadályozhatja az antitestkötést és növelheti a jel / zaj arányt, ami a célkoncentráció alábecsülését eredményezi.

a fehérje ismert koncentrációi mind a mintamátrixba, mind a standard hígítószerbe kerülnek. A tüskés fehérjét a vizsgálat segítségével számszerűsítjük, majd összehasonlítjuk a mintamátrix és a standard hígítószer eredményeit.

Ha az eredmények azonosak, akkor a mintamátrix érvényesnek tekinthető a vizsgálati eljáráshoz. Ha a visszanyerés eltérő, akkor a mintamátrix komponensei zavarják az analit detektálását.

mi van, ha egy tüske helyreállítási kísérlet azt jelzi, hogy a minta mátrix befolyásolja az eredményeket?

javasoljuk, hogy a standard görbét a mintamátrixban hígított standard alkalmazásával állítsuk elő. A mintamátrix eredményeire gyakorolt bármilyen hatás a standardban is jelen lesz, ezért a standard görbe és a minták összehasonlítása pontosabb. Sok ELISA készletünk erre a célra standard szérumhígítót tartalmaz.

egy másik megoldás a mintamátrix megváltoztatása. Például, ha tiszta biológiai mintát használnak, próbálja meg hígítani ezt standard hígítóban. Ezzel az opcióval azonban biztosítani kell, hogy az eredmények elemzésekor figyelembe vegyék a hígítási tényezőt, és hogy a koncentráció a standard görbe Lineáris szakaszán belül maradjon.

tekintse meg több ELISA készletünket, reagensünket és protokollunkat, vagy tekintse át membrán antitest tömbjeinket, például az ab133997 citokin tömböt, amely számos fehérje egyidejű mérésére használható.

ELISA guide

>> Következő oldal: Elisa hibaelhárítási tippek

<< Előző oldal: ELISA elemzés

töltse le a teljes útmutatót

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.