näytteet, joiden absorbanssiarvo jää standardikäyrän

vaihteluvälistä, jotta saadaan tarkka tulos, nämä näytteet on laimennettava tai tiivistettävä ennen Elisa-värjäystä. Näiden näytteiden osalta tuloksia analysoitaessa standardikäyrästä saatu pitoisuus on kerrottava laimennuskertoimella.

variaatiokertoimen laskeminen

kertoimen vaihtelu (CV) on standardipoikkeaman σ suhde keskiarvoon µ:

CV= σ
µ

tämä ilmaistaan prosenttiosuutena keskiarvon varianssista ja osoittaa tulosten mahdolliset epäjohdonmukaisuudet ja epätarkkuudet. Suurempi varianssi kertoo suuremmasta epäjohdonmukaisuudesta ja virheestä. Jotkut tietokoneohjelmat voivat laskea CV-arvot Elisan tuloksista.

Korkea CV voi johtua:

  • epätarkasta pipetoinnista; varmista, että pipetin kärjet ovat sinetöidyt pipettiin ennen käyttöä, jotta ne nostavat oikean nestemäärän
  • reagenssien roiskeet kuoppien välillä
  • sieni-kontaminaatio joko seulanäytteiden tai reagenssien välillä
  • ristikontaminaatio reagenssien välillä
  • lämpötilavaihtelut eri puolilla levyä; varmista, että levyt inkuboidaan vakaassa lämpötilassa pois vedosta
  • jotkut kuopat kuivuvat; varmista, että levyt ovat aina peittyneet inkubaatiovaiheissa

piikin saanto

piikin saanto määrittää, mikä vaikutus näytteiden aineosilla on vasta-aineen antigeenin toteamiseen. Esimerkiksi kudosviljelmän supernatantin sisältämät monet proteiinit voivat estää vasta-aineiden sitoutumisen ja lisätä signaali-kohina-suhdetta, mikä johtaa tavoitepitoisuuden aliarviointiin.

tunnetut proteiinipitoisuudet lisätään sekä näytematriisiin että standardilaimennimeen. Testikemikaalin pitoisuus määritetään testikemikaalin ja vakiolaimennusaineen avulla, ja testikemikaalin tuloksia verrataan.

Jos tulokset ovat identtiset, näytematriisia pidetään kelvollisena määritysmenetelmää varten. Jos saanto on erilainen, näytematriisin komponentit häiritsevät analyytin havaitsemista.

Mitä jos piikkien talteenottokoe osoittaisi näytematriisin vaikuttavan tuloksiin?

suosittelemme standardikäyrän tuottamista mallimatriisissa laimennetulla standardilla. Mahdolliset vaikutukset näytematriisin tuloksiin näkyvät myös standardissa, joten standardikäyrän ja näytteiden vertailu on tarkempaa. Monet ELISA-pakkauksistamme sisältävät standardiseerumilaimenninta tähän tarkoitukseen.

toinen ratkaisu on muuttaa näytematriisia. Jos käytetään esimerkiksi siistiä biologista näytettä, yritä laimentaa se tavallisella laimennusaineella. Tämän vaihtoehdon avulla sinun on kuitenkin varmistettava, että laimennuskerroin otetaan huomioon analysoitaessa tuloksia ja että pitoisuus pysyy standardikäyrän lineaarisessa osassa.

Katso lisää ELISA-pakkauksiamme, reagenssejamme ja protokolliamme tai käy läpi solukalvojen vasta-aineryhmiämme, kuten sytokiiniryhmiä ab133997, joita voidaan käyttää monien proteiinien mittaamiseen samanaikaisesti.

ELISA-opas

>>Seuraava sivu: ELISA-analyysi<<Edellinen sivu: ELISA-analyysi

lataa koko opas

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.