Vzorky, které mají hodnotu absorbance padající z rozmezí standardní křivky

Chcete-li získat přesný výsledek, tyto vzorky by měly být zředěné nebo koncentrované před pokračováním s ELISA barvení. U těchto vzorků musí být koncentrace získaná ze standardní křivky při analýze výsledků vynásobena ředicím faktorem.

Výpočet variačního koeficientu

koeficient variace (CV) je poměr směrodatné odchylky σ k průměru µ:

Cv= σ
µ

Toto je vyjádřeno jako procento rozptylu k průměru a označuje jakékoli nesrovnalosti a nepřesnosti ve výsledcích. Větší rozptyl naznačuje větší nekonzistenci a chybu. Některé počítačové programy mohou vypočítat hodnoty CV z výsledků ELISA.

vysoký CV může být způsoben:

  • nepřesné pipetování; zajištění pipety jsou uzavřené, aby se pipeta před použitím tak, že vypracuje na správný objem kapaliny
  • Stříkající činidel mezi studní
  • Bakteriální, plísňové kontaminace obrazovce buď vzorky nebo reagencie
  • Křížové kontaminace mezi reagenciemi
  • změny Teploty po celé desce; zajistit destičky se inkubují ve stabilní teplotě prostředí od konceptů
  • Některé z jamek vysychání; zajištění desky jsou vždy zahrnuty v inkubační kroky

Spike recovery

Spike recovery určuje účinek složek vzorku na detekci antigenu pomocí protilátek. Například, mnoho bílkoviny obsažené v supernatantu tkáňové kultury mohou bránit navázání protilátek a zvýšit poměr signálu k šumu, což vede k podhodnocení cílové koncentrace.

známé koncentrace proteinu jsou špičaté jak do matrice vzorku, tak do standardního ředidla. Špičatý protein je kvantifikován pomocí testu a výsledky z matrice vzorku a standardního ředidla jsou porovnány.

pokud jsou výsledky identické, považuje se matrice vzorku za platnou pro testovací postup. Pokud je obnova odlišná, pak komponenty ve vzorkové matrici interferují s detekcí analytu.

Co když experiment s obnovou hrotu ukázal, že matice vzorku ovlivňuje výsledky?

doporučujeme vyrobit standardní křivku za použití standardní zředěné v matrici vzorku. Jakékoli účinky na výsledky z matrice vzorků budou také přítomny ve standardu, a proto je srovnání mezi standardní křivkou a vzorky přesnější. Mnoho našich souprav ELISA obsahuje pro tento účel standardní ředidlo séra.

dalším řešením je změna matrice vzorku. Pokud se například použije čistý biologický vzorek, zkuste jej ředit standardním ředidlem. Při této možnosti však budete muset zajistit, aby byl při analýze výsledků zohledněn faktor ředění a aby koncentrace zůstala v lineární části standardní křivky.

Prohlédněte si více našich Elisa sad, činidel a protokolů nebo si prohlédněte naše membránové protilátkové pole, jako je cytokinové pole ab133997, které lze použít k měření mnoha proteinů současně.

ELISA průvodce

>> Další stránka: ELISA tipy pro odstraňování problémů

<< Předchozí stránka: ELISA analýzy

Stáhněte si kompletní průvodce

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.